熒光標(biāo)記抗體系列
流式細(xì)胞術(shù)（Flow CytoMetry，F(xiàn)CM）是根據(jù)單個(gè)細(xì)胞不同形態(tài)、表面標(biāo)志物、內(nèi)容物的差異，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞固有的或特異性標(biāo)記的信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分析與細(xì)胞分選目的的一種方法。經(jīng)過近五十年的發(fā)展和完善，流式細(xì)胞術(shù)技術(shù)已經(jīng)十分成熟，并被廣泛的運(yùn)用于從基礎(chǔ)研究到臨床實(shí)踐的各個(gè)方面，涵蓋了細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、藥理學(xué)、遺傳學(xué)及臨床檢驗(yàn)等領(lǐng)域，在各學(xué)科中發(fā)揮著重要的作用。
隨著流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域的日益廣泛，熒光標(biāo)記產(chǎn)品的種類、數(shù)量也在不斷增多，加上多色分析實(shí)驗(yàn)方案需求的增長，熒光標(biāo)記抗體如何選擇，也成為了流式技術(shù)是否能被成功應(yīng)用的關(guān)鍵因素之一。
? 熒光標(biāo)記抗體
抗體是機(jī)體組織在感受到特定外來物質(zhì)時(shí)由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）分泌、被免疫系統(tǒng)用來鑒別及中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的蛋白質(zhì)。而熒光抗體標(biāo)記技術(shù)是將熒光素以化學(xué)方法與特異性抗體共價(jià)結(jié)合，形成熒光素-蛋白質(zhì)結(jié)合物（即熒光標(biāo)記抗體），此結(jié)合物仍保留著抗體活性，同時(shí)具有熒光素的示蹤作用。
注：圖片來源于網(wǎng)絡(luò)
? 抗體熒光標(biāo)記的選擇
1. 如果實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)單一指標(biāo)：
不同熒光標(biāo)記在不同的儀器上強(qiáng)度不同。以FACS Calibur儀器為例：PE＞APC＞PE-Cy5＞PerCP-Cy5.5＞FITC＞PerCP，通常來說，PE最強(qiáng)，適用于弱表達(dá)抗原。FITC強(qiáng)度較弱，適用于強(qiáng)表達(dá)抗原。使用時(shí)需根據(jù)檢測(cè)的目標(biāo)蛋白進(jìn)行具體選擇。
2. 如果同時(shí)檢測(cè)多個(gè)指標(biāo)：
確認(rèn)流式細(xì)胞儀能檢測(cè)多少個(gè)通道：流式抗體每個(gè)通道只能選擇一種熒光素，且各個(gè)通道之間的熒光素可以隨意搭配。
3. 常用熒光標(biāo)記：
FITC、PE、APC、PerCP-Cy5.5等。
? 抗體熒光標(biāo)記的方式
抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實(shí)驗(yàn)過程中，盡量減少實(shí)驗(yàn)工序和過程，以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi)，盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而不去做間接標(biāo)記。
? 熒光標(biāo)記抗體的應(yīng)用
熒光標(biāo)記抗體目前主要應(yīng)用于癌癥，免疫學(xué)，心血管，外泌體，神經(jīng)科學(xué)，發(fā)育生物學(xué)，MSC，細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞增殖/活力研究，細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，新陳代謝，臨床診斷等領(lǐng)域的研究，典型應(yīng)用為MSC鑒定和免疫學(xué)流式分析等。
1. MSC表面標(biāo)志物：
國際細(xì)胞治療學(xué)會(huì) (ISCT) 認(rèn)定，MSC細(xì)胞表達(dá)CD73、CD90 與 CD105，不表達(dá)CD11b、CD14、CD19、CD34、CD45、CD79a與HLA-DR，其中CD73、CD90 、CD105、CD45為MSC必檢標(biāo)志物。
2. T淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志物：
CD3、CD4、CD8與CD45等。
為更好的滿足廣大客戶對(duì)流式抗體的應(yīng)用需求，全式金自主研發(fā)了多款帶有不同熒光標(biāo)記的直標(biāo)流式抗體，可應(yīng)用于MSC鑒定和免疫學(xué)分析，能夠快速高效地進(jìn)行細(xì)胞表面不同標(biāo)志物的流式檢測(cè)。
應(yīng)用領(lǐng)域-MSC鑒定
? CD73
CD73蛋白分子量約為70 kD，通常由兩個(gè)相同的亞基通過糖基磷脂酰肌醇(GPI)錨定在細(xì)胞表面形成同源二聚體，可將單磷酸腺苷(AMP)水解為腺苷。CD73作為淋巴細(xì)胞分化的標(biāo)志，在一些免疫缺陷病中表達(dá)減弱。據(jù)研究報(bào)道，CD73是一種潛在的生物標(biāo)志物，其高表達(dá)與多種類型腫瘤的不良預(yù)后密切相關(guān)。
? Anti-Human CD73，F(xiàn)ITC (HF101)
? Anti-Human CD73，PE (HF102)
? Anti-Human CD73，APC (HF104)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD73單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素FITC、PE、APC偶聯(lián)制得，用于細(xì)胞表面CD73抗原的流式檢測(cè)。
◇ 明顯區(qū)分陽性和陰性細(xì)胞群
? CD105
CD105又稱為內(nèi)皮糖蛋白（Endoglin），是位于細(xì)胞表面的I型跨膜蛋白，由同源二聚體組成，分子量約為90 kD。CD105是TGF-β受體復(fù)合物之一，高度結(jié)合TGF-β1和β3，但與β2不結(jié)合。CD105在血管內(nèi)皮細(xì)胞中高度表達(dá)，是腫瘤血管生成的標(biāo)志性分子。
? Anti-Human CD105，PE (HF112)
? Anti-Human CD105，APC (HF114)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD105單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素PE、APC偶聯(lián)制得，用于細(xì)胞表面CD105抗原的流式檢測(cè)。
? CD90
CD90又稱為Thy 1，是一種分子量為25-37 kD的糖蛋白，通過糖基磷脂酰肌醇 (GPI) 錨定在細(xì)胞膜表面，屬于免疫球蛋白超家族。CD90是微血管內(nèi)皮細(xì)胞活化的標(biāo)志，與新生血管形成有關(guān)，也是鑒別MSC的重要標(biāo)志之一。CD90與β2和β3整合素結(jié)合，參與細(xì)胞粘附的調(diào)控。
? Anti-Human CD90，APC (HF134)
該產(chǎn)品通過親和層析純化人CD90單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素APC偶聯(lián)制得，用于細(xì)胞表面CD90抗原的流式檢測(cè)。
? CD45
CD45，也被稱為白細(xì)胞共同抗原 (LCA) 或蛋白酪氨酸磷酸酶受體C (PTPRC)，由一類結(jié)構(gòu)相似，分子量在180-240 kDa之間的單鏈I型跨膜糖蛋白組成。CD45是一種酪氨酸磷酸酶，通過使包括p56Lck、p59Fyn和其它Src 家族激酶在內(nèi)的底物去磷酸化，在T和B細(xì)胞抗原受體介導(dǎo)的激活中起關(guān)鍵作用。此外，CD45是細(xì)胞膜上信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵分子，在淋巴細(xì)胞的發(fā)育成熟、功能調(diào)節(jié)及信號(hào)傳遞中具有重要意義。
? Anti-Human CD45，F(xiàn)ITC (HF121)
?Anti-Human CD45，PerCP-Cy5.5 (HF125)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD45單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素FITC、PerCP-Cy5.5偶聯(lián)制得，用于細(xì)胞表面CD45抗原的流式檢測(cè)。
◇ CD45在MSC細(xì)胞表面不表達(dá)；在PBMC細(xì)胞表面強(qiáng)表達(dá)，用CD45-FITC、CD45-PerCP-Cy5.5分別標(biāo)記后，可明顯區(qū)分陽性和陰性細(xì)胞群。
? 多色流式抗體共染
? Human MSC Characterization Kit (HF001)
該產(chǎn)品專門用于人MSC表面標(biāo)志物的流式檢測(cè)和鑒定，包含三種用于鑒定人MSC的熒光標(biāo)記抗體，以及一種用于鑒定非MSC的熒光標(biāo)記抗體。通過流式檢測(cè)，MSC表達(dá)陽性標(biāo)志物CD73、CD90和CD105的比例≥ 95%，同時(shí)表達(dá)陰性標(biāo)志物CD45的比例≤ 2%。
◇ 產(chǎn)品特點(diǎn)
? 采用多色流式抗體共染，包含CD73+、CD90+、CD105+、CD45-共4種抗體。
? 最大限度減少檢測(cè)所需細(xì)胞量。
? 特異性強(qiáng)且操作簡便，適用于各種來源MSC的鑒定。
◇ 人臍帶來源MSC鑒定，其中CD73、CD90和CD105表達(dá)比例≥ 95%，CD45表達(dá)比例≤ 2%。
應(yīng)用領(lǐng)域-免疫學(xué)流式分析
? CD3
CD3，是由五條肽鏈（CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3η、CD3ζ）組成的蛋白復(fù)合物，屬于免疫球蛋白超家族的一員。CD3分子與T細(xì)胞受體(TCR)結(jié)合，共同參與T細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及T細(xì)胞的活化。該CD3單克隆抗體特異性識(shí)別CD3/TCR復(fù)合物中的CD3ε鏈，可用于T細(xì)胞的激活和擴(kuò)增。
? Anti-Human CD3，F(xiàn)ITC (HF151)
? Anti-Human CD3，PE (HF152)
? Anti-Human CD3，APC (HF154)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD3單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素FITC、PE、APC偶聯(lián)制得，用于細(xì)胞表面CD3抗原的流式檢測(cè)。
? CD4
CD4，是一種55 kDa的單鏈I型跨膜糖蛋白，為T細(xì)胞受體（TCR）識(shí)別抗原的共受體，與MHCⅡ類分子的非多肽區(qū)結(jié)合，參與T細(xì)胞TCR識(shí)別抗原的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。CD4也是HIV的主要受體。在巨噬細(xì)胞或NKT細(xì)胞中，CD4在TCR/LCK不依賴信號(hào)通路中，調(diào)控細(xì)胞的分化、激活、細(xì)胞因子表達(dá)和細(xì)胞遷移。
? Anti-Human CD4，F(xiàn)ITC (HF141)
?Anti-Human CD4，PE (HF142)
? Anti-Human CD4，APC (HF144)
該產(chǎn)品通過親和層析純化CD4單克隆抗體后，在最佳條件下與熒光素FITC、PE、APC偶聯(lián)制得，主要應(yīng)用于細(xì)胞表面CD4抗原的檢測(cè)。
◇ 明顯區(qū)分陽性和陰性細(xì)胞群
◇ 不同熒光標(biāo)記的抗體混合染色后，分離效果較好，特異性強(qiáng)。
熒光標(biāo)記抗體產(chǎn)品信息
