Q：DNA 產(chǎn)量低
A：
? 裂解不充分：減少起始材料的用量。檢查樣品中是否加入了 Proteinase K溶液。如果提取的材料為動(dòng)物組織，盡量將組織切碎，并要保證材料完全浸泡在裂解液中。適當(dāng)延長裂解時(shí)間。
? 提取材料質(zhì)量不好：盡量選用新鮮材料，樣品采集后應(yīng)盡快保存在 -70℃或液氮中。DNA 的產(chǎn)量取決于材料的種類和幼嫩程度。
? 離心柱堵塞：過柱前檢查裂解液是否清亮，去除溶液中過于粘稠的不溶物。
? 洗滌溶液中未添加無水乙醇。必須在洗滌溶液中添加合適比例的無水乙醇。
? 洗脫條件不合適：洗脫液 EB 或超純水最好預(yù)先加熱至 70℃，用超純水洗脫前應(yīng)檢查其pH 值是否在 7.0-8.5 之間，如 pH 值小于 7 將明顯影響洗脫效率，需調(diào)節(jié)后再進(jìn)行洗脫。洗脫液應(yīng)盡量加到離心柱的中央，在離心前室溫靜置 1 分鐘。
? DNA 斷裂或降解：避免因移液槍反復(fù)吹吸或反復(fù)凍融樣品造成的 DNA 損傷。避免在操作過程中帶入外源 DNase 污染。
Q：洗脫液顏色發(fā)黑或硅膠膜脫色 ( 動(dòng)物組織或鼠尾材料 )
A：來源于組織的色素大量結(jié)合在離心柱上并與 DNA 一并洗脫：在過柱前檢查是否已加入乙醇，乙醇可防止色素與硅膠膜結(jié)合。在裂解液結(jié)合步驟可適當(dāng)加大轉(zhuǎn)速和延長離心時(shí)間。
? RNA 污染：可在樣品材料制備過程中添加適量的 RNase A 降解 RNA。
Q：影響下游的酶切
A：
? 純化的 DNA 中有乙醇?xì)埩簦涸谙礈觳襟E中可能會(huì)帶來乙醇的殘留。加入洗脫液之前將離心柱在最大轉(zhuǎn)速下離心 2-3 分鐘徹底干燥離心柱。
? 純化的 DNA 中有鹽分殘留：采用正確的洗滌操作步驟，用不同 CB 溶液洗滌后再用 WB 洗滌。
